1. (2023·湖北模拟) 三氯生是一种广谱抑菌物质，可用于基因工程中筛选含目的基因的受体菌。某科研团队通过先筛选出一种对三氯生抗性较强的重组质粒(如图1)，再将可以受温度调控的基因插入该质粒上，构建了温度调控表达质粒。请回答下列问题：

1. （1） 利用从细菌中提取的DNA通过PCR技术获取fabV­A基因(或fabV­B基因)时，至少需经过次扩增可获得8个双链等长的目的基因。实验操作时，微量离心管中需加入的物质有：模板、引物、原料、。下图2为PCR产物的电泳结果，操作较理想的泳道有条。

   

3. （2） 图1中，步骤Ⅰ需要的工具酶是；步骤Ⅱ常用的方法是用Ca^2＋处理使细菌成为；为达到步骤Ⅲ预期的筛选目的，所用物质X最可能为。
5. （3） 为获得一种增强大肠杆菌对三氯生的抵抗作用效果较好的重组质粒，将含有不同质粒的大肠杆菌分别接种到相应培养基中。培养一段时间后，结果如图3，则适宜选作构建温度调控表达质粒的是。

   

7. （4） 科研工作者对上述选出的质粒进行改造，获得了图4所示质粒。其中S₁和S₂是启动子，P₁和P₂是终止子。H基因在高温下会抑制S₁ ， L基因在低温下会抑制S₂。

   ① 如果将lacZ基因和GFP(绿色荧光蛋白)基因插入图4质粒中，且使得低温下只表达GFP基因，高温下只表达lacZ基因，则lacZ基因插在之间，而GFP基因的插入位置及注意点是。

   ② 若以大肠杆菌为受体细胞，筛选上述①中插入GFP基因成功的受体细胞的依据是：大肠杆菌能在含的培养基中生长，且。