1. (2022高二下·南京期末) 一种天然蛋白t-PA能高效降解因血浆纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药，但是心梗患者注射大剂量的t-PA会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA蛋白第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低其诱发出血的副作用。据此，先对天然t-PA基因的碱基序列进行改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。下图表示相关的目的基因、载体及限制酶识别序列和切割位点，pCLY11为质粒，请回答下列问题：

1. （1） 可以先提取细胞的来合成总cDNA，再从cDNA文库中获取t-PA基因。通过改造t-PA基因制造出性能优异的改良t-PA蛋白的过程被称为工程。
3. （2） 若改造后的t-PA基因的黏性末端如上图所示，则需要选用限制酶切割质粒pCLY11，保证质粒与t-PA改良基因高效连接。再用DNA连接酶催化形成键，构建重组质粒。
5. （3） 以大肠杆菌作为受体细胞，在含新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，原因是。成功获取能生产改良t-PA蛋白的工程菌株后，利用（填“固体”或“液体”）培养基在发酵罐中进行大量生产。
7. （4） 除了用工程菌株，还可以用下列方法从转基因牛乳汁中获得改良t-PA蛋白：

   

   过程②常用的方法是；在过程④前需要取囊胚的细胞做DNA分析进行性别鉴定；为了保证t-PA改良基因能在乳腺细胞中表达，构建基因表达载体需要将其与等调控元件重组在一起。