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  • 1. (2022·绍兴模拟) 细胞表面的B分子(受B基因控制)具有重要作用,研究发现肿瘤细胞B基因不表达或低表达。为验证B基因表达对小鼠前胃癌细胞(MFC)的影响,科研人员利用下列材料和用具进行了实验。

    材料与用具:MFC悬液、含有B基因的真核细胞表达载体pcDNA3、不含B基因的真核细胞表达载体pcDNA3(空白载体)、动物细胞培养液、卡氏瓶、流式细胞仪(可以测定每个细胞内DNA含量从而确定细胞所处时期)等。

    实验思路:

    ①____。

    ②体外细胞培养实验:分别将MFC、含有外源B基因的MFC(记作MFCB+)、含有空白载体的MFC(记作MFCB-)等量接种于动物细胞培养基中,一段时间后用流式细胞仪检测三组细胞的细胞周期情况。结果如下表:

    组别

    G0/G1(%)

    S(%)

    G2/M(%)

    总计(%)

    MFC

    55.0

    31.1

    13.9

    100.0

    MFCB+

    66.7

    19.6

    13.7

    100.0

    MFCB-

    54.7

    30.7

    14.6

    100.0

    (备注:G0期为静止期,此时期细胞暂不分裂)

    ③体内细胞培养实验:将适量的MFC、MFCB+和MFCB-分别接种于去除胸腺的三组小鼠(裸鼠)体内,接种后每天测量计算裸鼠体内肿瘤体积大小,并记录。

    回答下列问题:

    1. (1) 完善实验思路:①
    2. (2) 体外细胞培养的实验结论是:
    3. (3) MFC中是否含有B基因?。购买得到的MFC一般需要先进行处理,再在动物细胞培养基中进行培养。表达载体pcDNA3需要具备相应限制性核酸内切酶识别序列、抗性基因和结合位点,以便于B基因与之形成重组DNA、筛选阳性细胞和在MFCB+中的表达。
    4. (4) 体内细胞培养实验使用裸鼠的原因是:。临床上也可以通过检测肿瘤的血流量来反映肿瘤生长速度,从肿瘤代谢角度分析,这种检测的机理是
    5. (5) 预期体内细胞培养实验结果(用曲线图表示)。

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